腺(xian)相(xiang)關病毒(du) (AAV) 是基(ji)因(yin)治療中(zhong)使用最廣(guang)泛的(de)傳遞機制。近(jin)年來，基于AAV病(bing)毒開發的(de)基因療法的(de)研發及(ji)臨床試驗注冊(ce)項目數量呈指數級增長，截(jie)至目前，美國FDA已(yi)批準(zhun)五項(xiang)AAV療法，同(tong)時，用于基因(yin)治(zhi)療的AAV也是(shi)全(quan)球市(shi)場上最為昂貴的藥(yao)物之一，其(qi)中售價最高的Hemgenix®，每劑價格約為350萬美(mei)元。由于該療法每劑量(liang)可(ke)能需(xu)要1011-1016載量的(de)AAV病毒，如何實現高效的AAV生產，已成為(wei)工藝(yi)流(liu)程(cheng)優化中的重要一環。

西(xi)美杰代(dai)理(li)的(de)Mirus成立于1996年(nian)(nian)，在核酸遞送領域深耕(geng)多年(nian)(nian)，TransIT-VirusGEN® GMP 轉染試劑支(zhi)持(chi)AAV及慢病毒(LV)從科研到GMP商(shang)業(ye)級(ji)別生產。不同于傳統基于單組分的轉染(ran)試(shi)劑(ji)(如陽(yang)離子聚合物(wu)聚乙烯亞胺，PEI)，Mirus將專利的多聚(ju)物及脂質(zhi)技術進行多重組(zu)合，針對(dui)不同(tong)細胞(bao)類(lei)型，不同(tong)應用場(chang)景，有著(zhu)不(bu)同轉染方案。

Mirus專利遞轉平臺Polymers + Lipids的多重、多功(gong)能組(zu)合(he)

     在病毒(du)生產(chan)工藝(yi)方面，除了(le)需(xu)要克服細胞遞轉(zhuan)(zhuan)過程中的多重阻(zu)礙(ai)，以(yi)實(shi)現(xian)更高效轉(zhuan)(zhuan)染和更低(di)細(xi)胞毒性；增強子的(de)加入，還可大幅度提升多種血(xue)清型AAV病毒生(sheng)產載量。但Mirus并沒有(you)止(zhi)步于此，為了進一步提高下(xia)游(you)生產中(zhong)的(de)AAV產量， 今(jin)年(nian)七(qi)月(yue)底西美杰代理的(de)Mirus發(fa)布用于AAV生(sheng)產的(de)，可(ke)搭配Mirus 或其他品牌轉染試劑(ji) (如PEI等)。基(ji)于HEK293懸浮細胞(bao)數(shu)據，相對于老版本(ben)AAV增強(qiang)子，RevIT? AAV Enhancer可將AAV基因組滴度提高1.2-4.9倍，并(bing)且使用更便捷，非常容易整(zheng)合入現有的AAV生產工(gong)藝流程中。Mirus RevIT? AAV Enhancer的推出，使得AAV上(shang)游(you)生產成本進一(yi)步降低成為可(ke)能，進而降低基因治(zhi)療藥物單劑量(liang)成本(ben)。

RevIT? AAV Enhancer

RevIT? AAV Enhancer：可以將AAV基因(yin)組滴度(du)提升1.2-4.9倍

實驗結果顯示(shi)，平(ping)行(xing)對比Mirus TransIT-VirusGEN®搭配(pei)老(lao)版(ban)本AAV增強子(zi)(VirusGen + Enh 1.0)和新版(ban)本RevIT? AAV Enhancer (VirusGen + RevIT)，針(zhen)對AAV2、AAV8、AAV9不(bu)同(tong)血清型，基因組(zu)滴度(du)分(fen)別(bie)有著1.6、4.9以及1.2倍提升。除此(ci)之(zhi)外，在測試的所有血清型中，使(shi)用RevIT? AAV Enhancer也在(zai)不同(tong)程度上(shang)收獲了更高(gao)比例的實心率 (圖1)。該結果表(biao)明，在(zai)搭配Mirus TransIT-VirusGEN®轉染(ran)試(shi)劑時，新版本(ben)增(zeng)強(qiang)劑RevIT? AAV Enhancer可(ke)顯(xian)著提高AAV基因組滴度(GC/mL)及實心率(%Full Capsids)。

圖1 . 相比(bi)Mirus老(lao)版本增強(qiang)子，加入RevIT? AAV Enhancer后，可將AAV基因(yin)組拷貝數提升(sheng)1.2-4.9倍，同時改善AAV病毒實(shi)心率。

RevIT? AAV Enhancer具有廣泛(fan)適配性，搭配其他(ta)品牌轉染試劑（如(ru)PEI），AAV病毒基因組滴度有著顯著提(ti)升

平(ping)行(xing)測試兩個品牌(pai)轉(zhuan)染試劑：Polyplus FectoVIR®轉染試(shi)劑(“Polymer F”)以及Polyplus PEIpro®轉染試劑(“Polymer P”)，在加入Mirus RevIT? AAV Enhancer，針對(dui)不同血清型AAV2、AAV8、AAV9，AAV基因組(zu)滴(di)度分別有著1.7-2.0x、1.7-2.2x、2.2-2.3x提(ti)升(圖2)。實驗(yan)結果(guo)表(biao)明，在(zai)搭配其他(ta)品牌病毒(du)轉染試劑時，Mirus RevIT? AAV Enhancer也可顯(xian)著提(ti)高AAV病毒基因(yin)組滴度(du)(GC/mL)。

圖2. “Polymer F”以及“Polymer P”病(bing)(bing)毒(du)轉(zhuan)染試劑搭配Mirus RevIT? AAV Enhancer，針對不同血(xue)清型(xing)AAV，其病(bing)(bing)毒(du)基(ji)因組滴度都(dou)有(you)著(zhu)顯著(zhu)提升(sheng)。

RevIT? AAV Enhancer具有廣泛的適配(pei)性，可適用(yong)于(yu)不同培養基體系

Mirus TransIT-VirusGEN®轉染試(shi)劑搭配RevIT? AAV Enhancer，在(zai)不同品牌(pai)的病毒(du)生產培養基中，具有很好的(de)兼容性。測(ce)試(shi)使(shi)用293-VP 2.0細胞，搭配培養基類(lei)型(xing)包括VPM (Thermo Fisher) 及 BalanCD HEK 293 (Irvine Scientific)。實驗結果表明，針對不同(tong)血清型AAV2、AAV5、AAV8、AAV9，RevIT? AAV Enhancer在(zai)不同培(pei)養(yang)基實驗條(tiao)件下，AAV病毒基因組滴度(du)提升方面并無顯著差(cha)異(yi)（圖3）。

圖3. 更換(huan)不同品牌病毒(du)生產培養基(ji)，AAV病毒(du)基(ji)因組滴度的增加無顯著差異。

RevIT? AAV Enhancer實驗流(liu)程更靈活，在轉(zhuan)染的不同時間窗口加(jia)入有著近(jin)似表現

為了進(jin)一步(bu)確認加(jia)入RevIT? AAV Enhancer來提高(gao)AAV產量是否需要嚴格把控加(jia)入時間，平行測試(shi)了不同(tong)加入的時間(jian)點，包括(kuo)轉染(ran)前30min或(huo)60min、轉染時及轉染后。實(shi)驗結果顯示，相比(bi)于對照(zhao)組，在(zai)不同(tong)時間點(dian)加入RevIT? AAV Enhancer， AAV8病毒基因(yin)組(zu)滴度均有穩步(bu)的提升(2倍(bei))，并且病毒(du)實(shi)心(xin)率也穩定保持在相(xiang)同水平（圖4）。該實驗結果表(biao)明，RevIT? AAV Enhancer加入時間點的靈(ling)活性，一定程(cheng)度上簡化了生產(chan)工作流。

圖4.  RevIT? AAV Enhancer在轉染的不(bu)同時(shi)間窗口加入有著(zhu)近似表現

實驗tips：如(ru)何(he)進行病(bing)毒轉(zhuan)染試劑評估？什么(me)是病(bing)毒載量？如(ru)何(he)檢測(ce)？

  更(geng)多詳細信息(xi)，請查看Technical Resources中 ，更加詳(xiang)細地(di)介紹了(le)檢測和計算病毒滴度(du)的詳(xiang)細方法。

相關產(chan)品(pin)信息(xi)及(ji)鏈接

 
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請登錄Mirus官網線(xian)上工(gong)具(ju)，支持超過(guo)1000種細胞類型、多種核酸類型(xing)轉(zhuan)染試劑查詢。

Mirus產品(pin)年鑒

   西(xi)美(mei)杰(jie)代(dai)理的美(mei)國Mirus公(gong)司成(cheng)立(li)于1995年，是世界(jie)上很早開發高效、低毒轉(zhuan)染(ran)試劑(ji)(ji)的(de)公(gong)司，同(tong)時也是該類試劑(ji)(ji)的(de)主要供應商之一。其產(chan)(chan)(chan)品線涵蓋化學轉(zhuan)染(ran)試劑(ji)(ji)、電(dian)轉(zhuan)染(ran)產(chan)(chan)(chan)品、病(bing)毒生產(chan)(chan)(chan)和轉(zhuan)導(dao)產(chan)(chan)(chan)品，適用于基(ji)因功能研(yan)究、蛋白生產(chan)(chan)(chan)、病(bing)毒載體生產(chan)(chan)(chan)和動物模型構建等領域(yu)。Mirus被公(gong)認(ren)為轉(zhuan)染(ran)試劑(ji)(ji)開發的(de)領跑者，其許多(duo)杰出(chu)成(cheng)果獲得世界(jie)公(gong)認(ren)與(yu)廣(guang)大(da)用戶(hu)的(de)好評。

   北京西美杰科技有限公(gong)司是Mirus中(zhong)國區代理(li)，始終秉(bing)承著專業、嚴謹的(de)態度為客(ke)戶(hu)提供優質的(de)產品(pin)與服務，Mirus熱銷轉染產品常備現貨。如果您對(dui)上述產品感興趣，歡迎致電(dian)北京西美杰客(ke)服熱線(xian)400-050-4006或登錄網站sdtlkj.cn了(le)解更多產品信息。